本试剂盒基于中和 ELISA 分析技术,将 RBD 蛋白预先包被在酶标板上,之后将阳性对照标准品、阴性对照和分析样本分别加入到微孔中反应,再加入HRP标记的ACE2蛋白,样本中的RBD中和抗体会阻断RBD和ACE2之间的相互作用,清洗掉未结合的试剂,将显色底物溶液添加到微孔中显色,显色强度与样本中的RBD中和抗体浓度成反比。
本试剂盒用于测定血清和血浆样本RBD中和抗体的浓度。
标准点(ug/ml) | O.D. | 抑制率 |
10 | 0.06 | 97.08% |
5 | 0.11 | 94.41% |
2.5 | 0.29 | 85.18% |
1.25 | 0.84 | 56.44% |
0.625 | 1.44 | 25.53% |
0.3125 | 1.76 | 9.04% |
0.15625 | 1.72 | 10.96% |
阴性对照 | 1.94 | / |
问题 | 原因 | 解决方案 |
标准曲线差 | 移液不精确 | 检查和校正移液器 |
标准品准备不正确 | 进行正确的标准品梯度稀释 | |
O.D 值低 | 孵育时间太短 | 保证充足的孵育时间 |
温度不正确 | 试剂平衡至室温并保证孵育温度正确 | |
试剂体积不正确 | 检查移液器并确保加样体积与说明书一致 | |
精密度低 | 移液不精确 | 检查和校正移液器 |
混匀不充分 | 充分混匀和吸取试剂 | |
洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 | |
背景值高 | 洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 |
清洗液污染 | 重新配置清洗液 | |
灵敏度低 | 试剂盒储存不当 | 试剂盒短期整体保存于4℃,长期保存根据说明书分开保存各组分 |
样品清单及储存条件
样品名称 | 规格 | 描述 | 推荐储存条件 |
预包板 | 1 板 | 96孔聚苯乙烯微孔板(12列*8孔),预包被RBD蛋白。 | 密封状态放置于-20℃保存。 |
阳性对照 | 1 管 | 12L重组人源RBD中和抗体,浓度 1mg/mL,临用前用样本稀释液配置7个标准点。 | 放置于-20℃保存。 |
阴性对照 | 1 管 | 60L阴性对照,临用前用样本稀释液1:10 稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃保存。 |
检测溶液A | 1 管 | 12L HRP标记 ACE2 蛋白(含防腐剂),临用前用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃保存。 |
样本稀释液 | 1 瓶 | 25 mL稀释液(含防腐剂),用于阳性对照、 阴性对照、血清、血浆的稀释。 | 放置于4℃保存。 |
检测溶液稀释液 | 1 瓶 | 25 mL稀释液(含防腐剂),用于检测溶液A的稀释。 | 放置于4℃保存。 |
浓缩清洗液 | 1 瓶 | 25 mL (20×)浓缩清洗液(含防腐剂), 临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度。 | 放置于4℃保存。 |
显色液 | 1 瓶 | 12 mL TMB(四甲基联苯胺)。 | 放置于4℃保存。 |
终止液 | 1 瓶 | 6 mL 2M 酸液。 | 放置于4℃保存。 |
封板膜 | 4 片 | 用于实验中封闭酶标板。 | 放置于常温保存。 |
*在试剂盒保质期内使用
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