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千亿级人源抗体库

千亿级人源抗体库简介

普健新一代人源天然scFv抗体库(铂金版文库),已构建成功,其库容更大1011 pfu,样本更丰富,多样性更好,种系基因覆盖较全,符合抗体药物种系基因分布规律

该抗体库可从数亿抗体分子中筛选出亲和力和特异性极高的候选抗体,广泛应用于抗体药物开发、诊断检测类抗体发现以及抗体工程改造等领域。

噬菌体展示技术优势

过去由于均质性的人源抗体通过传统的制备方法很难大量获得,限制了抗体的大规模临床应用。而90年代初发展起来的噬菌体展示技术以其独特的优势,为人源抗体的发现提供了一条有力的途径,在抗体药物的研发和生产中愈发受到重视。

噬菌体抗体将基因型和表型统一于一体,将选择能力与扩增能力偶联起来,具有强大的筛选能力,能够在体外模拟体内的抗体生成过程,可以不经杂交瘤途径,甚至不经过免疫就可以制备和生产单克隆抗体。

噬菌体展示与传统抗体技术的比较


抗体药物研究进展

2002,阿达木单抗(Humira®)成为第一个通过噬菌体展示获得上市批准的全人源抗体,连续多年成为全球药王。目前,噬菌体展示相继上市了9个抗体药物。随着最畅销的几个抗体药物专利相继到期,更多公司加速投身到抗体药物开发中,有大量通过噬菌体展示获得的人源抗体正处于临床研究阶段。


已上市全人源抗体药物(噬菌体展示9个,转基因小鼠21个)

人源天然scFv抗体库优势


噬菌体展示scFv抗体库构建流程


人源天然scFv抗体库优势:

1. 序列正确性高,现阶段库容已达近千亿级别(1011 pfu)

2. 样本来源丰富:包含Caucasian White(高加索白人)Asian(亚洲人)Arabian(阿拉伯人)African(非裔),不同人种的轻链和重链。(样本还在持续增加扩容中)

3. 两步法建库,先连入轻链再连入重链,将来自全世界不同地区人种来源的轻链和重链随机组合,保证了库的高质量和多样性。

4. 分为κλ两种轻链亚型的单链抗体库,与大多数商业化混合库不同,即可用于筛选κ型抗体,也可用于筛选λ型的高亲和力抗体。

5. 带有His标签,可直接用phagemid表达抗体,His标签纯化。

抗体库QC检测

1. 总插入率及正确率
片段插入率100%,抗体序列正确率>86%


2. 抗体序列多样性分析

种系基因(Germline)分析:种系基因主要指单倍体生殖细胞和干细胞中所含有,未发生重排的全部基因。我们一般只分析抗体序列里面V基因的种系分布。

互补决定区(CDR)分析:抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈,这个区域称高变区(HVR)。在L链、H链的V区中有三个高变区,该部位因在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补,又称互补性决定区。


2.1种系基因分布特性

普健人源天然scFv抗体库分为κλ两种轻链亚型分析两种亚轻链种系基因分布比例重链种系基因分布比例,表明普健人源抗体库种系基因覆盖较全,分布特性符合抗体药物种系基因分布规律。


Κ型轻链种系基因分布比例



λ型轻链种系基因分布比例  


  

重链种系基因分布比例


2.2 CDR3长度分布分析

通过对Kλ两种亚型库的克隆各随机挑选500个克隆进行测序分析,无重复序列。其CDR3长度分布符合正态分布,与人源抗体药物CDR3长度分布规律相符合。



Κ型轻链抗体CDR3长度分布比例



λCDR3长度分布比例



重链CDR3长度分布比例


项目实例:


普健生物人源scFv天然噬菌体文库筛选结果