普健生物(武汉)科技有限公司(AtaGenix)
技术服务

羊驼免疫纳米抗体文库定制

服务简介

纳米抗体(nanobody,Nb), 即重链单域抗体VHH (variable domain of heavy chain of heavy-chainantibody) ,该类抗体只包含一个重链可变区(VHH)和CH2,CH3区,相比于其他抗体,轻链天然缺失。纳米抗体晶体直径2.5nm,长4nm,是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。

 


纳米抗体和传统抗体的优劣对比:

性能

传统抗体

纳米抗体

抗体表达

表达时易形成包涵体,互相沾粘聚集沉淀。

表达量高,表达的抗体具有高水溶性,易复性。

抗体稳定性

易失活,高温或极度PH下失效或分解

高稳定性,高耐性,90℃处理后依然保持较高的活性

免疫原性

较高

较低

组织穿透力

较低

较高,可穿透血脑屏障

半衰期

较长

较短,血清清除速度快

纳米抗体的应用

纳米抗体能用于构建多重不同类型的分子结构,在医学诊断和治疗上实用性较高。例如可以构建成双功能抗体或双特异性抗体进行疾病的靶向治疗。通过基因改造,纳米抗体可以形成多聚体,大大提高了抗体与抗原的结合能力。通过基因工程形成纳米抗体融合蛋白可以带上酶或者毒素,融合蛋白在组织穿透,清除速度及稳定性上比普通抗体更有优势,可以用于低浓度抗原的检测。

普健优势

针对特定靶点的纳米抗体定制服务

普健可以提供针对特定靶点的特异性纳米抗体定制服务,包括抗原检测,羊驼免疫,采血,效价检测,纳米抗体噬菌体库构建及淘选,特异性高亲和力纳米抗体筛选,表达,检测一条龙服务。亲和力可以达到10-8~10-10M级别。

案例展示

针对靶点B的特异性纳米抗体定制服务:

1. 靶点B免疫羊驼,进行四轮免疫后采血提取PBMC,经RNA提取,反转录获得cDNA后扩增获取VHH可变区片段



2. 免疫羊驼纳米抗体库的构建:

将获得的VHH可变区片段连入噬菌体展示载体,电转宿主菌,最终获得库容为8.76*10^9纳米抗体库,插入正确率为100%


3. 免疫羊驼纳米抗体库的淘选及筛选:

利用构建的免疫羊驼纳米抗体库,针对靶点B蛋白,完成三轮淘选,其淘选富集度如下:


 


筛选96个克隆,其中阳性克隆共94个,阳性率为97.9%

 


排除重复序列,最终获得了7条不同的抗体序列。将这些抗体序列表达成可溶性的VHH抗体蛋白,进行再次验证,结果如下:



随机挑选两条抗体蛋白进行亲和力测定,结果如下:

R1P1-A10:KD:6.49E-09M


R1P1-H12:KD:1.52E-07M

咨询与订购

电话:027-87001869

邮件:info@atagenix.com