所需设备及试剂
• 450 nm 滤光片酶标仪,含 540 nm 或 570nm 校正波长更佳
•单道或多道微量移液器,移液器枪头
•去离子水
• 500 mL 量筒
•样品稀释管或不同规格 EP 管
•吸水纸
样品收集和储存
1) 血清:全血室温放置 60 分钟或 4℃过夜,然后 1000 x g 离心
15 分钟,取上清检测,或分装后于 ≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。
2) 血浆:使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆,样品采集后 30 分钟内 1000 x g 离心 15 分钟,取上清检测,或分装后于≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。
如果样品已经稀释,从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数,即为样品的实际浓度。
检测范围
250pg/mL—16000pg/mL
最低检测限(MDD)
200pg/mL
MDD 是测试 20 个零标准(稀释液)的平均 O.D.值上加两倍标准差后计算相应的浓度来确定的。
精密度
批内差: CV<12%
批间差: CV<15%
稳定性
试剂盒按推荐温度保存 6 个月,信号强度降低小于 10%。
实验细节说明
1. 在试剂盒标签上的有效期内使用,不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2. 如果样本检测值超出标准曲线范围,可适当调整稀释倍数并重新测定,或预估样本中抗体浓度,在 实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
3. 为避免交叉污染,不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头,每管试剂使用单独的容器储存。
4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
5. 显色液避光保存,临用前 15 分钟从冰箱取出在室温平衡。
6. 浓缩清洗液(20×)需使用去离子水 1:20 稀释至工作浓度,去离子水不包含在试剂盒中,需实验 人员自备。
7. 终止液为酸性溶液,具有轻微腐蚀性,使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接触, 使用大量清水冲洗后观察接触部位反应,如情节严重请及时就医。
8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用,已开封的试剂盒建议在 1 个月内使用,未开封的试剂盒所有试剂 均按试剂瓶标签上所示保存,收到试剂盒后请将阳性对照、检测溶液 A、检测溶液 B、以及预包板 保存于-20℃,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
样品清单及储存条件
样品名称 |
规格 |
描述 |
推荐储存条件 |
预包板 |
1 板 |
96孔聚苯乙烯微孔板(12条*8孔),预包被N蛋白。 |
密封状态放置于-20℃保存。 |
阳性对照 |
1 瓶 | 12μL 针对 N 蛋白重组人源 IgG 抗体, 浓度 0.8mg/mL。 |
放置于-20℃ 保存。 |
检测溶液A |
1 瓶 |
12μL 生物素标记的抗人 IgG 二抗,临
用前用检测溶液稀释液 1:10000 稀释
至工作浓度。 |
放置于-20℃ 保存。 |
检测溶液B |
1 瓶 |
12μL HRP 标记的链酶亲和素,临用前
用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作
浓度。 |
放置于-20℃ 保存。 |
样本稀释液 |
1 瓶 |
25 mL 稀释液(含防腐剂),用于阳性
对照、血清、血浆的稀释。 |
放置于4℃ 保存。 |
检测溶液稀释液 |
1 瓶 |
25 mL 稀释液(含防腐剂),用于检测
溶液 A,检测溶液 B 的稀释。 |
放置于4℃ 保存。 |
浓缩清洗液 |
1 瓶 |
25 mL (20×)浓度的清洗液(含防
腐剂),临用前用去离子水 1:20 稀释
至工作浓度。 |
放置于4℃ 保存。 |
显色液 |
1 瓶 |
12 mL TMB(四甲基联苯胺)。 |
放置于4℃ 保存。 |
终止液 |
1 瓶 |
6 mL 2M 酸液。 |
放置于4℃ 保存。 |
封板膜 |
4 片 |
用于实验中封闭酶标板。 |
放置于常温保存。 |
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