普健生物（武汉）科技有限公司（AtaGenix）
PNGase F
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- 产品信息（Product Details）
- 如何订购
- 说明书
概述（Summary）icon
产品英文名（Product Name）
PNGase F
产品中文名
肽N-糖苷酶
产品描述（Description）
肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖，及杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。
PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
储存条件（Storage）
储存于 -20°C，保质期 12 个月。
运输方式（Shipping）
蓝冰运输
Note
For research use only .
状态（Form）
Liquid
储存溶液（Buffer）
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol
表达宿主（Host）
E. coli
酶切位点
PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连接糖 (x = H 或寡糖) 。
分子量
48.40 kDa
酶活
50000U/ml
酶活单位定义
1个酶活力单位指在10ul的反应体系中，37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。
实验示例（Experiment Example）icon
使用方法（Standard Operating Procedure）icon
在变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化
1. 在水中加入1~20μg目标糖蛋白、Glycoprotein Denaturing Buffer (10X) 1μl至最终体积为10μl。
2. 在100°C加热10min使样品变性。
3. 将样品在冰上冷却，离心10秒。
4. 加入2μl的GlycoBuffer 2(10X)、2ul的10% NP-40、6μl去离子水，总反应体积为20ul。
5. 加入2μl的PNGase F, 轻轻混匀。
6. 37°C孵育1h。
注意：糖蛋白的去糖基化可以通过SDS-PAGE上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
注意：糖蛋白底物的差异，可能需要延长孵育时间。
在非变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化
1. 在水中加入1~20μg目标糖蛋白、GlycoBuffer 2 (10X) 2 μ l至最终体积为20μl。
2. 加入2~5μl的PNGase F, 轻轻混匀。
3. 37°C孵育4-24h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。
1X Glycoprotein Denaturing Buffer
0.5% SDS
40 mM DTT
1X NP-40
1% NP-40 in MilliQ-H2O
1X GlycoBuffer 2
20 mM Tris,PH 7.5
1. 在水中加入1~20μg目标糖蛋白、Glycoprotein Denaturing Buffer (10X) 1μl至最终体积为10μl。
2. 在100°C加热10min使样品变性。
3. 将样品在冰上冷却，离心10秒。
4. 加入2μl的GlycoBuffer 2(10X)、2ul的10% NP-40、6μl去离子水，总反应体积为20ul。
5. 加入2μl的PNGase F, 轻轻混匀。
6. 37°C孵育1h。
注意：糖蛋白的去糖基化可以通过SDS-PAGE上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
注意：糖蛋白底物的差异，可能需要延长孵育时间。
在非变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化
1. 在水中加入1~20μg目标糖蛋白、GlycoBuffer 2 (10X) 2 μ l至最终体积为20μl。
2. 加入2~5μl的PNGase F, 轻轻混匀。
3. 37°C孵育4-24h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。
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0.5% SDS
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1X NP-40
1% NP-40 in MilliQ-H2O
1X GlycoBuffer 2
20 mM Tris,PH 7.5
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