噬菌体展示技术

2017-01-02 09:48:00

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武汉普健生物噬菌体展示技术突出优点是直接将可现的表达型与其基因型联系在一起,再利用其配体的特异性亲和力,将所感兴趣的蛋白质或多肽挑选出来,更多关于噬菌体展示技术欢迎点击咨询。

01

筛选过程:

将展示文库作为可溶相,而将与欲选择的重组基因产物有特异性亲和力的靶分子固定在一个固相载体上,洗去不能与固定相特异结合的文库的大部分成员,将特异结合的成员洗脱下来,再进一步扩增,进入下一轮淘选。

02

最常用的噬菌体:

溶源性的单链丝状噬菌体(如M13、f1和fd)与传统获得抗体技术的比较:

免疫血清 杂交瘤技术 噬菌体展示技术
抗体形式: 多克隆抗体 单克隆抗体 单克隆基因重组抗体

宿主细胞:

N/A 杂交瘤 细菌
筛选范围: N/A ~103 107~108
时间: 几个月 几个月 几周
操作: 简单 繁杂 相对简单
免疫: 必须 必须 可避免
人源抗体: 可以
费用:
生产量: 有限 有限 无限
基因获取: N/A 再克隆 直接
应用前景: 有限 有限 广阔
03

随机肽库:

将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合,在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。利用噬菌体展示随机肽库可以高通量筛选各种抗原的抗原表位。

04

抗体人源化/治疗药物/诊断试剂用基因工程抗体开发:

免疫库:
对于特定免疫抗原的抗体淘选的效率较高,但一般仅适用于一种特异性抗体的选择,库容量要求不高,一般106-8的库容量就可满足需要。

天然库:
不用免疫动物。骨髓内和骨髓外所有抗体基因都包含在内,所构建的抗体库适用于所有抗原所对应的抗体的选择,库容量要求较高,最小需要达到109,因为目前估算的自然界的抗原种类在这个数量级上。

种属来源:
兔源,鼠源,人源

库的类型:
scFv(由VH和VL组成,并由一个小肽(Gly4Ser)3连接成一个单链多肽)库、Fab(含有VH-CH,VL-CL,并由二硫键连接在一起)库和VHH(只有重链可变区)库

普健生物可以提供:
1.噬菌体展示抗体文库构建
2.噬菌体展示多肽文库构建
3. 抗原表位筛选
4. 抗体亲和力成熟
5. 抗体人源化


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