普健生物(武汉)科技有限公司(AtaGenix)

2019-nCoV Surrogate Virus Neutralization Test Kit(K417N,E484K,N501Y)

  • 1
ATK00018
-
+
现货
咨询在线客服
  • 产品信息(Product Details)
  • 如何订购
  • 说明书
产品概述(Summary)icon
产品名称(Product name)
2019-nCoV Surrogate Virus Neutralization Test Kit(K417N,E484K,N501Y)
货号(Catalog#)
ATK00018
描述(description)
SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(K417N,E484K,N501Y)基于中和抗体ELISA检测的原理,可以检测血清或血浆中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗体浓度,这种抗体可以阻断RBD(K417N,E484K,N501Y)和ACE2之间的相互作用,该试剂盒包含两个关键成分:HRP标记的重组人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(K417N,E484K,N501Y)蛋白。

本试剂盒用于测定血清或血浆样本 RBD(K417N,E484K,N501Y)中和抗体的浓度。
运输方式(Shipping)
蓝冰运输。
稳定性&储存(Stability &Storage)
收到试剂盒后请将阳性对照、阴性对照、检测溶液 A 以及预包板保存于-20℃,封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于 10%。
使用方法(Standard Operating Procedure)

所需设备及试剂

450 nm滤光片酶标仪,含540 nm570nm校正波长更佳

单道或多道微量移液器,移液器枪头

去离子水

500 mL量筒

样品稀释管或不同规格EP

吸水纸

 

一、样品收集与储存

处理所有的血液和血清,请按照NCCLS提供的处理和储存血清和血浆样本的建议(1990

H18-A批准的血液样本处理和处理标准程序)。

血清样本:全血室温放置60分钟或4℃过夜,然后1000 x g离心15分钟,取上清检测,或分

装后于≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。

血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆,样品采集后30分钟内1000 x g离心

15分钟,取上清检测,或分装后于≤-20℃冰箱保存,避免样品反复冻融。


二、试剂准备

使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。

20×浓缩清洗液:如果浓缩清洗液中有晶体析出,平衡至室温并摇匀,直到晶体完全溶解,25mL浓缩清洗液使用去离子水定容至500mL,得到清洗液。

待测样本:将待测样本用样本稀释液按照体积比1:9稀释,例如10μL样本加入90μL样本稀释液。

阳性对照:临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用样本稀释液

1:100稀释至工作浓度。

阴性对照:临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用样本稀释液1:10稀释至工作浓度。

检测溶液AHRP标记):临用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心,使液体集中于管底,使用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。

显色液:避光保存,显色时100μL /孔。室温下孵育810分钟。

终止液:显色完毕后50μL /孔。

 

三、实验步骤

使用前将所有试剂和样本置于室温,建议对所有标准品、对照品和样本进行一式两份的分析。

1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和样本。

2. 从板架上取下多余的微孔板条,将其放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封保存于-20℃。

3. 将稀释的阳性对照、阴性对照和待测样本分别与检测溶液A按照 1:1等体积混合。例如,将100μL阳性对照与100μL检测溶液A混合,该步骤可在96PCR板或者96Elisa板中进行。

4. 将阳性对照混合物、阴性对照混合物和待测样本混合物各100µL添加到对应的酶标板孔中,用封板膜盖好,37℃孵育1小时。

5. 弃去孔内液体,每孔加入 300μL的清洗液,轻微震荡后弃去孔内液体,将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍,使残留在孔内的液体全部去除,重复洗板 5 次,此过程也可采用尖嘴喷射瓶,多道移液器或自动洗板机来完成。

6. 每孔加入100μL显色液,37℃避光显色8-10分钟。

7. 每孔加入50μL终止液,孔里的颜色应该由蓝色变至黄色,如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀,轻轻震动酶标板使颜色均一。

8. 擦干酶标板底部水气,立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的O.D.值,如果波长校正可用,则设置为540 nm570 nm,如果波长校正不可用,则从450 nm的读数中减去540 nm570 nm的读数,这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差,如果没有校正波长,可直接读取450 nm的读数,但读值有可能不准确。

 

四、结果判读

为确保结果的有效性,每次检测必须包括阳性和阴性对照,阳性对照和阴性对照检测OD450必须在下表所列的范围内,如果OD450值不符合下表要求,则试验无效,必须重复进行。

项目

OD450

结果判断

阳性对照

0.3

通过

阴性对照

0.9

通过

用抑制率来判定样本中抗SARS-CoV-2中和抗体的水平,判定公式如下:

 

五、判定阈值

项目

阈值

结果

检测结果判读

       中和抗体检测

20%

阳性

检测到中和抗体

20%

阴性

未检测到中和抗体

 

六、精密度

批内差:CV<8%

批间差:CV<10%

 

七、稳定性

试剂盒按推荐温度保存6个月,信号强度降低小于 10%

 

八、实验细节说明

1. 在试剂盒标签上的有效期内使用,不要与其他厂家的试剂盒混合使用。

2. 如果阴性对照或阳性对照检测OD值超出检测范围,可适当缩短显色时间。

3. 为避免交叉污染,不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头,每管试剂使用单独的容器储存。

4. 在孵育过程中贴紧封板膜。

5. 显色液避光保存,临用前15分钟从冰箱取出室温平衡。

6. 浓缩清洗液(20×)需使用去离子水120稀释至工作浓度,去离子水不包含在试剂盒中,需实验人员自备。

7. 终止液为酸性溶液,具有轻微腐蚀性,使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位,如不慎接触,使用大量清水冲洗后观察接触部位反应,如情节严重请及时就医。

8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用,已开封的试剂盒建议在1个月内使用,未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存,收到试剂盒后请将阴性对照、阳性对照、检测溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

 

九、常见问题解决指南

问题

可能原因

解决方案

阳性质控读数低或者异常

检测溶液A和预包板失活

a.

增加反应时间或检测试剂浓度以补偿可能丧失的活性

仪器设置错误

a.

a.

 

检查仪器设置

b.

提前一小时预热酶标仪

加样错误

a.

检查加样步骤

试剂过早提前准备

a.

确保工作液现配现用

温度不稳定

 

a.

孵育时间和温度参见说明书,避免反复冻融

 

读数背景高

样品中含有抑制剂

 

a.

加入空白孔

b.

保证DMSO < 1%

洗涤不完全

a.

增加洗涤次数和洗液量

缓冲液样品污染、降解

 

a.

确保正确准备,使用和存储了缓冲液和样品

 

读数不稳定

移液或稀释方法不一致

a.

校正移液器

 

b.

 

准备预混液以减少移液不一致

c.

设置平行孔以获得更准确的结果

孔中有气泡

a.

轻震酶标板以去除气泡

 

读数过高

a.

调整样品浓度以达到最佳信号强度。

 

b.

孵育时间调整至45分钟

 

试剂和样品混合不充分

a.

确保试剂与样品完全混合

 

显色不完全

缓冲液残留或污染

 

a.

阴性对照中的颜色应在添加TMB底物后10秒钟内出现。

如未按上述时间显色可考虑以下情况:

a.在添加TMB之前确保没有污染或残留的缓冲液

b.延长TMB孵育时间到15分钟


组分和说明(Component and Instruction)icon

样品名称

规格

描述

推荐储存条件

预包板

1

96孔聚苯乙烯微孔板(12*8孔),预包被RBD(K417N,E484K,N501Y)蛋白。

密封状态放置于-20℃保存

阳性对照

1

12μL /管阳性对照,临用前用样本稀释液1:100 稀释至工作浓度。

放置于-20℃保存

阴性对照

1

60μL /管阴性对照,临用前用样本稀释液1:10 稀释至工作浓度。

放置于-20℃保存

检测溶液A

 

1

12μL/-HRP标记 ACE2 蛋白(含防腐剂),临用前用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。

放置于-20℃保存

样本稀释液

1

25 mL稀释液(含防腐剂),用于待测样本的稀释

放置于4℃保存

检测溶液稀释液

1

25 mL稀释液(含防腐剂),用于检测溶液A的稀释

放置于4℃保存

浓缩清洗液

1

25 mL 20×)浓缩清洗液(含防腐剂),临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度

放置于4℃保存

显色液

1

12 mL TMB(四甲基联苯胺)

放置于4℃保存

终止液

1

6 mL

放置于4℃保存

封板膜

3

用于实验中封闭酶标板。

放置于常温保存。

Noteicon
For research use only .

1搜索商品:关键字搜索;分类导航搜索;产品联系:手机/微信同号:15972188750,座机:027-65279366(推荐 !

2产品选购:确定好产品信息与规格,向产品客服询问底价

3提交订单:向客服提交收货人信息,选择送货方式,支付方式,发票信息

4产品发货:发票随产品一起发送,耐心等待收货即可


质量保证:

所售产品均经过严格的质量检验,确保所供产品的技术指标与生产厂家的目录、说明书、质检报告上的描述一致,请放心选购。


质量与免责说明:

买方验收产品时,如发现产品短缺、不匹配、包装破损等情况,请保持产品原包装状态,并在收货七个工作日内,以书面方式向我司提出异议。逾期未提出异议视为合格。

买方保管产品时,应按照产品标签、说明书所示保管条件保存,如系保管不当导致产品质量问题,恕不受理。

买方使用产品时。如发现产品质量问题,应在使用初期提出,而非在使用完或快使用完时提出,以备我司回收产品,确认产品质量。如确属质量问题,我司负责调换或退货。发生索赔事宜,我司将在产品价格额度范围内酌情赔偿,恕不受理超出产品本身价值之部分。自收货之日起,超过三个月未反映产品问题,恕不退换。

我司所提供的产品仅限于专业人士的科学研究使用,不得用于临床诊断或者治疗,若有单位或者个人擅自改变我司产品用途,我司不承担任何责任。