Mycoplasma PCR Test Kit

1. 收取待检样品。贴壁细胞：待细胞生长至80%左右即可，使用细胞刮刀刮取细胞（送检细胞不能用消化液消化细胞）；悬浮细胞：待细胞生长至80%左右即可直接进入下一步离心；

2. 1000rpm离心5min，弃上清，留100-200μl培养基重悬细胞，沸水浴10min；      

3. 将煮沸的细胞悬浮液12000rpm离心3-5min；

4. 所得样品取4μl直接用于PCR检测，或冻存于-20℃备用；

注：一般以6孔板接种细胞，当细胞生长至80-90％时即可取样进行检测。培养液中的青霉素和链霉素不会影响检测效果。

5. PCR检测

5.1充分融化PCR反应液，按照下表配制PCR反应体系：

5.2 将PCR反应管放入PCR仪，参照以下参数运行PCR反应程序：

5.3琼脂糖凝胶电泳。

6. 凝胶成像观察

注：支原体阳性细胞扩增片段约270bp。

M ：marker

+  ：阳性对照

-  ：阴性对照

1-3：检测为阳性的细胞

4-5：检测为阴性的细胞

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