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282023-03
噬菌体展示技术的关键步骤流程
历经40余年的发展，噬菌体展示技术日趋成熟，已然成为抗体发现技术的主流平台之一。随着抗体工程的高速发展，抗体药从鼠源到全人源的产业已成趋势，科研人员对于抗体功能的改造、双/多特异性抗体的研发需求更甚，对抗体筛选和优化的技术要求也进一步提高，噬菌体展示技术也在这个过程中也发挥越来越重要作用。
噬菌体展示抗体库是目前发展最成熟、应用最为广泛的基因工程抗体筛选技术，通过噬菌体展示技术使基因工程抗体以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白 gpⅢ或 gpⅧ的 N 端，从而将抗体的基因型和表型连接起来，用固相或液相化抗原与抗体库孵育，经「吸附—洗脱—扩增」数个循环使特异性克隆得以富集，因而具有简便、快速和高效的优点。
噬菌体展示技术的优势
1. 方法简便快速、耗时少。从 mRNA 提取到抗体库构建，继而筛选出特异性抗体的阳性克隆仅需几周的时间。
2. 筛选容量大、效率高。噬菌体抗体库中通常含有 106-109 个不同抗原结合特异性的抗体分子克隆，可以对百万乃至亿万个分子进行选择，且每一轮「吸附-洗脱-扩增」可以使抗原特异性较强的克隆得到富集，非常容易从抗体库中筛选到特异性抗体。
3. 易于在基因水平操作，蛋白质表型与基因型统一。可以根据不同目的「随心所欲」地改造抗体结构、进行基因突变，制备各种新型抗体；另外，还可以将噬菌体抗体与一些功能性分子偶联形成免疫毒素、酶标抗体等，进一步拓宽了抗体的应用范围。
4. 易于规模化生产。
噬菌体展示技术流程
一般来说，噬菌体展示技术有以下5个步骤:
步骤1:构建噬菌体展示库
重组DNA技术用于将外来cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中，使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面，而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库，如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。
步骤2：结合
这些库暴露于选定的目标，只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体，如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。
步骤3：洗涤
未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走，只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。
步骤4：洗脱
洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体
步骤5：放大
展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增，或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。
噬菌体展示技术由于其广泛的应用领域备受关注，这就要求广大从业者在熟悉，掌握噬菌体展示技术的同时，广泛的开展交流与学习，不断地在应用噬菌体展示这一技术的同时取得新的突破。
噬菌体展示抗体库是目前发展最成熟、应用最为广泛的基因工程抗体筛选技术，通过噬菌体展示技术使基因工程抗体以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白 gpⅢ或 gpⅧ的 N 端，从而将抗体的基因型和表型连接起来，用固相或液相化抗原与抗体库孵育，经「吸附—洗脱—扩增」数个循环使特异性克隆得以富集，因而具有简便、快速和高效的优点。
噬菌体展示技术的优势
1. 方法简便快速、耗时少。从 mRNA 提取到抗体库构建，继而筛选出特异性抗体的阳性克隆仅需几周的时间。
2. 筛选容量大、效率高。噬菌体抗体库中通常含有 106-109 个不同抗原结合特异性的抗体分子克隆，可以对百万乃至亿万个分子进行选择，且每一轮「吸附-洗脱-扩增」可以使抗原特异性较强的克隆得到富集，非常容易从抗体库中筛选到特异性抗体。
3. 易于在基因水平操作，蛋白质表型与基因型统一。可以根据不同目的「随心所欲」地改造抗体结构、进行基因突变，制备各种新型抗体；另外，还可以将噬菌体抗体与一些功能性分子偶联形成免疫毒素、酶标抗体等，进一步拓宽了抗体的应用范围。
4. 易于规模化生产。
噬菌体展示技术流程
一般来说，噬菌体展示技术有以下5个步骤:
步骤1:构建噬菌体展示库
重组DNA技术用于将外来cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中，使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面，而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库，如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。
步骤2：结合
这些库暴露于选定的目标，只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体，如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。
步骤3：洗涤
未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走，只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。
步骤4：洗脱
洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体
步骤5：放大
展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增，或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。
噬菌体展示技术由于其广泛的应用领域备受关注，这就要求广大从业者在熟悉，掌握噬菌体展示技术的同时，广泛的开展交流与学习，不断地在应用噬菌体展示这一技术的同时取得新的突破。
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