普健生物(武汉)科技有限公司(AtaGenix)

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普健生物-一种多快好省的蛋白表达技术

  重组蛋白,越来越广泛运用到了制药领域中,特别是人源化单抗,被广泛应用在临床试验中。而在临床实验中,经常会遇到需要在短时间内生产一定量蛋白的情况,所以,对重组蛋白的生产技术有一定的要求。瞬时基因表达,在很大程度上解决了我们这个方面的问题。

  那么,具体要怎么做呢?下面,且看普健生物带您详细了解这项蛋白重组的神技-哺乳动物瞬时表达技术(Transient Gene Expression,TGE)。

  其实,不如动物瞬时表达的核心主要表现在三个方面:宿主细胞系、表达载体的最优化设计以及转染条件的选择。

  宿主细胞系

  哺乳动物细胞作为宿主细胞的优势在于其翻译后修饰能力,如糖基化、磷酸化和二硫键正确折叠等,可使重组蛋白形成正确结构从而具有生物活性。瞬时表达中最常用的哺乳细胞是HEK293和CHO细胞及两者的亚系。

  表达载体的最优化设计

  哺乳动物细胞中基因表达受一系列事件影响,包括转录RNA加工、mRNA转运及降解、翻译、翻译后修饰及分泌(对于分泌蛋白)。设计载体时可通过添加及组合各种调控元件影响这些事件,使TGE蛋白表达最优化。

  转染条件的摸索

  瞬时转染是TGE工艺非常关键的步骤,转染效率一定程度上决定了重组蛋白的表达水平。常用的转染试剂包括脂质体、磷酸钙及聚乙烯酰胺(PEI),可用于悬浮或贴壁培养的细胞,具有转化效率高,细胞毒性低等优点。脂质体价格昂贵不适合应用于转染规模通常在数百毫升以上的TGE工艺。磷酸钙介导转染应用较早,是除PEI外在大规模瞬时表达中应用最多的转染试剂,但磷酸钙会与悬浮培养基中防止细胞聚集的成分形成沉淀物,在转染前需要有换液过程,不适合大规模瞬时表达。

  普健生物蛋白表达主要采用自主研发和优化的PEI及商业化转染试剂,可以用于大批量的生产。通过多年的实践和操作,解决在各个过程中可能出现的各种问题,致力于为您提供优质的重组蛋白表达产品。