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抗体人源化—IVD研发神器

  自杂交瘤技术诞生以来,鼠源性单克隆抗体在临床诊断及治疗等方面发挥了巨大的作用,但鼠源单克隆抗体具有较强的免疫原性,在临床应用中会引起人抗鼠抗体(HAMA)反应,导致鼠源抗体半衰期缩短,治疗效果减弱。随着抗体工程的发展, 利用抗体技术对鼠源抗体进行人源化改造是解决治疗用单克隆抗体的有效途径。

抗体人源化

  抗体人源化是指利用DNA重组和蛋白质工程技术,对抗体基因进行重组,可在保留鼠源抗体对抗原有效结合部位的同时最大限度地降低非结合部位的鼠源性,这种通过重组基因表达的既有鼠源成分又有人源成分的抗体称为人源化抗体。当前正处于临床研究的多种抗体中,嵌合抗体和人源化抗体所占比例大于70%。目前的人源化抗体,主要用于肿瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病的治疗以及抗移植排斥反应和抗病毒感染等方面。

人源化抗体的分类

  1.嵌合抗体

  利用DNA重组技术,将异源抗体的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中,转染哺乳动物细胞表达出嵌合抗体。

  2.改型抗体

  改型抗体也称CDR植入抗体(CDR grafting antibody),抗体可变区的CDR是抗体识别和结合抗原的区域,直接决定抗体的特异性。将鼠源单抗的CDR移植至人源抗体可变区,替代人源抗体CDR,使人源抗体获得鼠源单抗的抗原结合特异性,同时减少其异源性。

  3.全人重组抗体

  全人重组抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术,将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中,使动物表达人类抗体,达到人源化改造的目的。


  普健生物拥有完善的蛋白表达纯化平台,稳定细胞系构建平台和噬菌体展示技术平台,可提供治疗性抗体发现整体解决方案,更有曾上市过治疗性抗体药物的专家团队为您保驾护航。

  1.抗体可变区/抗体全长测序

  通过鼠源单克隆抗体细胞系进行抗体可变区/抗体全长基因序列测序,2-4周。

  2.嵌合抗体表达及抗原抗体结合分析

  结合可变区序列及人源恒定区序列设计嵌合抗体,通过哺乳系统进行嵌合抗体表达;对嵌合抗体进行抗原抗体结合分析,同时可提供样本给客户进行亲和力检测及生物活性检测,8-10周。

  3.人源化抗体设计

  基于CDR移植、回复突变、生物信息学分析等方法对VH和VL区域进行人源化设计,根据需求提供不同套餐供客户选择,2-3周。抗体人源化改造的关键问题就在于确定抗体FR区上对抗体亲和力产生重大影响的人源化替换位点,即定位影响CDR区构象的关键氨基酸,这决定了人源化抗体项目的成败。

  4.人源化抗体表达

  密码子优化,基因合成,亚克隆,转染,抗体表达及纯化,8-10周。

  5.人源化抗体性质检测

  结合力检测:ELISA/FACS测定EC50值,或Biacore/Octet测定KD值;人源化抗体体外生物活性分析并与嵌合抗体进行比较;人源化抗体与同源性物种的交叉反应性分析;人源化抗体生物物理特性分析:SEC-HPLC分析,SDS-PAGE分析,DSC分析。